AQP4ex è una isoforma recentemente scoperta di AQP4 generata da un meccanismo di lettura fuori quadro della traduzione. È espressa fortemente nelle estremità dei vasi sanguigni degli astrociti come componente del complesso supramolecolare, comunemente chiamato array ortogonale di particelle (OAP), insieme alle isoforme canoniche M1 e M23 di AQP4. Esperimenti precedenti di mutagenesi diretta hanno suggerito il potenziale ruolo della serina331 e della serina335, situate nel peptide esteso di AQP4ex, nell’attività del canale dell’acqua tramite fosforilazione. Nel presente studio abbiamo valutato la fosforilazione effettiva di AQP4ex umano. Un’analisi bioinformatica su piccola scala ha indicato che solo la Ser335 è conservata in AQP4ex di uomo, topo e ratto. Il sito di fosforilazione della Ser335 è stato valutato mediante la generazione di anticorpi specifici per la fosforilazione nei conigli. La specificità dell’anticorpo è stata prima valutata confrontando il peptide fosforilato con il suo analogo non fosforilato mediante ELISA, confermata ulteriormente da esperimenti di mutagenesi diretta. Esperimenti di Western blot e immunofluorescenza hanno rivelato una forte espressione di AQP4ex fosforilato (p-AQP4ex) nel cervello umano e localizzazione nelle estremità degli astrociti perivasculari in assemblaggi supramolecolari identificati tramite esperimenti BN/PAGE. Tutti insieme, questi dati rivelano, per la prima volta, l’esistenza di una forma fosforilata di AQP4, alla Ser335 nella sequenza estesa esclusiva di AQP4ex. Pertanto, ci aspettiamo un importante ruolo fisiologico di p-AQP4ex nell’omeostasi dell’acqua del cervello umano.
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